平行反應監(jiān)測(Parallel reaction monitoring,PRM)能夠基于高分辨、高精度質譜的離子監(jiān)視技術,對目標蛋白質或肽段進行選擇性檢測,從而實現對目標蛋白質或肽段的定量。PRM可以同時監(jiān)控所有碎片離子,不需要識別和驗證特定離子,因而具有更快、更簡單的工作流程,可以實現對目標蛋白質或肽段的相對或絕對定量分析。
較高通量
通量遠超Western blot,一次可檢測50個蛋白
廣泛適用
不借助抗體,不受物種限制
準確性高
特異性檢測目標肽段,具有超高的定量準確性。
注意事項
需要DDA建庫
驗證定量蛋白質組學、翻譯后修飾蛋白質組學結果
針對特定的一個或幾個蛋白質進行絕對定量或相對定量分析
樣本類型 | 送樣量 | |
動物組織 | 常規(guī)組織(腦、心、肝、脾、肺、腎、肌肉等柔軟組織) | 10 mg |
堅硬組織(軟骨、毛發(fā)) | 100 mg | |
植物組織 | 柔軟組織(木本植物的葉、花等,草本植物,藻類,蕨類植物) | 200 mg |
堅硬組織(根、樹皮、樹枝,果實種子等) | 2 g | |
微生物 | 常見細菌、真菌菌體(菌體沉淀)、精細胞 | 30 μL |
細胞 | 懸浮/貼壁培養(yǎng)細胞(細胞計數/沉淀) | 2×106或20 μL |
液體類 | 血漿/血清(不去除高豐度) | 5 μL |
血漿/血清(去除高豐度-伯樂) | 100 μL | |
血漿/血清(去除高豐度-TOP2/TOP14) | 50 μL | |
血漿/血清(去除高豐度-DMB蛋白冠) | 50 μL | |
腦脊液(不去除高豐度) | 100 μL | |
腦脊液(去除高豐度-TOP2/TOP14) | 300 μL | |
卵泡液(不去高豐度) | 100 μL | |
卵泡液(去除高豐度-伯樂)、尿液,精液 | 1 mL | |
淋巴液、關節(jié)液、穿刺液、腹水 | 3 mL | |
唾液/淚液/乳汁 | 500 μL | |
培養(yǎng)基上清(不能使用含血清的培養(yǎng)基) | 5 mL | |
FFPE | 每片厚度10 μm,面積1.5×2 cm | 2-5片 |
其他 | 蛋白溶液(最佳Buffer是8M Urea) | 10 μg |
PRM技術是在多反應監(jiān)測(MRM)技術的基礎上演化而來的。它基于高分辨、高精度質譜,首先在一級質譜中選擇性地檢測目標肽段的母離子信息,隨后對母離子進行碎裂,在二級質譜中檢測所選擇的母離子窗口內的所有碎片的信息,從而實現對目標蛋白質的靶向檢測。
PRM可對目標蛋白質、目標肽段(如發(fā)生翻譯后修飾的肽段)進行選擇性檢測,從而實現對目標蛋白質/肽段的靶向驗證和相對或絕對定量,常用于廣篩之后的驗證實驗。