PRM可對?標蛋?質(zhì)、?標肽段(如發(fā)?翻譯后修飾的肽段)進?選擇性檢測,從而實現(xiàn)對?標蛋?質(zhì)/肽段的靶向驗證和相對或絕對定量。?于?篩之后的驗證實驗。
PRM技術是在多反應監(jiān)測(multiple reaction monitoring, MRM)技術的基礎上演化而來的 。 它基于?分辨 、?精度質(zhì)譜(如Orbitrap系列),?先利?四級桿質(zhì)量分析器的選擇檢測能力 ,在 一級質(zhì)譜中選擇性地檢測?標肽段的?離?信息; 隨后在collision cell中對?離?進?碎裂; 最后利?高分辨 、?質(zhì)量精度分析器在?級質(zhì)譜中檢測所選擇的?離?窗?內(nèi)的所有碎?的信息。
兩者都可?于差異較?的樣本(不同物種、不同組織部位),“有無”蛋白比較,不需要同位素標記,成本相對低;樣本不受限制,應?范圍?;
LFQ確定是數(shù)據(jù)重復性稍差,缺失值較多;
全息掃描DIA的重現(xiàn)性較高,所有離?信息都能采集,缺點是需要預先建?數(shù)據(jù)庫,數(shù)據(jù)分析較LFQ復雜。
DIA是全息掃描模式,能全?記錄樣本信息,定量準確性大大提高,重復性好,缺失值少,樣本采集時加?了保留時間校正同位素肽段,適合?樣本量,上機時間間隔可以較大,數(shù)據(jù)可回溯。可?于不同因素影響下的差異蛋?篩選,不同組織蛋?表圖譜繪制,疾病分型等等。
DIA技術是相較于傳統(tǒng)DDA技術而?的,傳統(tǒng)的DDA技術依賴于?級母離子的峰強度,選擇信號排名在前?位的另外,DIA技術將質(zhì)譜整個全掃描范圍分為若?個窗口,對每個窗口中的所有離子進?選擇、碎裂、檢測,從而無遺漏、無差異地獲得樣本中所有離子的全部碎片信息。
雖然DIA定量能力出色,但畢竟是非靶技術,結(jié)果最終還需要進?靶向驗證。但DIA的?準確性,能夠使后續(xù)靶向驗證的銜接性、?致性更高。從某種程度上來說,DIA實現(xiàn)了篩選與初步驗證的合?為?。
DIA定量原理與靶向技術相似,都是采?二級碎片離子進行定量。
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